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发布时间：2020-10-15 11:46 咨询量：
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产品详情
| 名称： | MTT-Cell Based Proliferation/Toxicity Assay Kit | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 介绍： | MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT分析为对活细胞内琥珀酸脱氢酶活性的比色测定，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。主要用于分析细胞生存能力及细胞增殖能力，也可用于药物的潜在毒性实验，因为药物可刺激或抑制细胞的生存及生长。甲臜溶解液可溶解细胞中的甲瓒并产生有色溶液。用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。 | |||||||||
| 货号： | K017 | |||||||||
| 套件组分： |
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| 故障排除指南： |
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| 所需但未提供的材料： | √ 移液器和枪头
√ 用于培养细胞的96孔板 √ 能够测量570 nm处的吸光度96孔酶标仪 √ 蒸馏水 | |||||||||
| 执行测定： | 步骤7中获得的数据（吸光度与细胞数的关系）图应提供具有线性部分的曲线。用于检测的细胞数量应在曲线的线性最佳部分内，并且吸光度值介于0.75和1.25之间，然后可以测量刺激和抑制细胞增殖。为获得最佳结果，应使用处于对数生长期的细胞，并且最终细胞数应不超过106个细胞/cm2。每个实验应在无细胞的孔中做空白对照，其中添加所有试剂。分析将包括：
1.空白孔仅包含培养基。 2.未经处理的对照细胞。 3.用待测物质处理过的测试细胞。 如果每孔使用的培养基超过100ul ，则相应增加MTT试剂的量；例如，对于250ul 培养基，请使用25ul MTT试剂。 | |||||||||
| 数据解释： | 低于对照细胞的吸光度值表明细胞增殖速率降低。相反，较高的吸收率表明细胞增殖增加。很少有增殖的细胞数量可以被细胞死亡所抵消。细胞死亡的证据可以从形态变化中推断出来。 | |||||||||
| 操作步骤：96孔板操作： | 如果您熟悉此过程并且知道要在特定测定中使用的细胞计数，则可以遵循此基本规程。
1.96孔板中的初始细胞在100ul 培养基中的密度为2000细胞/孔（用于增殖测定）或5000细胞/孔（毒性测定）（取决于细胞类型） 2.根据实验孵育适当的时间，并用待测物质进行处理。 3.加入10ul MTT试剂 4.在培养箱中孵育细胞3-4小时。黑褐色的formazan晶体在细胞中形成。如果细胞密度更高，可以相应地缩短孵育时间。 5.加入100ul formazan溶解溶液。 6.当紫色沉淀完全溶解时，在37°C孵育4小时。 7.记录在570 nm的吸光度。 注意： 1.由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 2.Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以56℃水浴孵育促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。 3.MTT配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时请勿使用。 |
