发现外泌体鉴定的重要性-武汉菲恩生物科技有限公司

发现外泌体鉴定的重要性

来源：菲恩生物发布时间：2023-09-26 16:36 点击量：

外泌体最早于1983年发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，1996年成为免疫学家的兴趣点。外泌体是目前为止定义最为明确的细胞外囊泡, 在细胞通讯和组织微环境调节中的重要作用。

外泌体由很多细胞释放，如B细胞，树突细胞，T细胞，表皮细胞，血小板等。存在于各种体液如羊水，腹水，鼻灌洗液，唾液，血清，血浆，乳汁，尿液，脑脊髓液，以及从细胞培养基等。细胞生成外泌体的生理目的推测是外泌体可能从细胞中清除过量和/或不必要的成分，以维持细胞内稳态。

外泌体富含胆固醇和鞘磷脂，具有脂质双分子层结构，几乎所有的外泌体都有微管蛋白、肌动蛋白结合蛋白、四跨膜蛋白。不同细胞来源的外泌体组成存在差异,例如肠上皮细胞来源的外泌体含有多种代谢酶及肠组织特异性A33抗原，B细胞来源的外泌体富含CD86和MHC分子，T细胞来源的外泌体表面有促凋亡的FasL受体。以下为典型外泌体的结构和内容物。

外泌体与免疫反应、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中枢神经系统相关疾病和癌症进展有关。外泌体递送到受体细胞的蛋白质、代谢产物和核酸有效地改变了它们的生物学反应。这种外泌体介导的反应可能是疾病促进或抑制。外泌体在调节复杂的细胞内通路中的内在特性推进了其在许多疾病的治疗控制中的潜在效用，包括神经退行性疾病和癌症。

外泌体被提取后一般悬浮于磷酸盐缓冲液。目前, 最常用的储存方法为冷冻保存, 但是冷冻保存可能会导致外泌体形状与物理性质的改变, 也可能导致多层囊泡的形成和聚集, 反复冻融会导致外泌体表面分子的生物特性、含量和标志物组成发生变化。对于功能性研究，根据研究设计建议对新鲜分离的外泌体进行立刻分析或在4 ℃或-20℃下短期保存后使用。但是对于长期保存用于治疗应用的外泌体，-80℃存储条件将是更可取的。

外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。主要方法包括：

透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。

纳米颗粒跟踪分析法：简称NTA，该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。

Western blot分子标志物检测：外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；参与生物功能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白X（ALIX）、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、热休克蛋白（HSP70、HSP90），以及细胞分泌的特异性蛋白。

亲脂染料标记外泌体：目前已发表的外泌体文章中，外泌体大多使用亲脂性染料进行标记，体内和体外都有较多应用。亲脂性染料主要分为两大类，第一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较广泛。

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